Това е индиректен метод за установяване на екстрацелуларен депозит на калциев хидроксиапатит, устяновяват се фосфатни и карбонатни калциеви съединения.
След няколко теста с различни концентрации на реагентите, установихме следният оптимален протокол:

1. Клетките, които се тестват са култивирани с различна концентрация върху кръгли стъкълца в плака, като експериментът се устяновява след 3, 7, 14 дни.
2. първоначално всяко стълкълце се промива внимателно дву или трикратно с дестилирана вода, за да се отмият йоните, които биха дали положителна реакция, без да са включени в хидроксиапатитените кристали
3. пробите се третират с 2% воден разтвор на АgNO3 за 40 мин на UV лампа, при което се постига утаяване на сребърни фосфати и карбонати (бяла утайка), и последващото редуциране на сребърните йони в утайката в метално сребро, което е с черец цвят и се визуализира.
4. промиват се пробите трикратно с дестилирана вода, за да отпаднат несвързаните йони сребро
5. промиване с 5% воден разтвор на натриев тисулфат за 2 мин., с което се постига пълна дифузия на несвързаното сребро
6. пробите се промиват трикратно с дестилирана вода, за да се отмие тиосулфатът
7. прави се контраоцветяване на пробите с Neutral Red за 2 мин.
8. промива се несвързаното багрило с дестилирана вода трикратно

резултати: Neutral Red оцветява ядрата на клетките и ги визуализира, а наличието на калциеви съединения се отчита по черните образувания в извънклетъчния матрикс.