Инкорпорация на BrdU

Това е бромодеоксиуридин, синтетичен нуклеозид - аналог на тимидина. Използва се за детекция на пролифериращи клетки в живи тъкани и култури. За метода се използва способността на BrdU да се инкорпорира в новоситезирана ДНК замествайки тимидина в процеса на ДНК-репликация. След определено време на инкубация на живите клетки със среда, в която има BrdU, се използва анти-BrdU антитяло, за да се установи наличието му в молекулата на ДНК. Клетките с активна репликация на ДНК са позитивни за BrdU. Свързването на антитялото изисква предварителна денатурация на ДНК, което при този метод обикновено се осъществява чрез третиране с киселина или висока температура.

Могат да се бележат адхезивни и суспензионни култури. Клетъчното култивиране се осъществява в зависимост от планираният експеримент, например при ELISA клетките се култивират директно в 96-ямкова плака, а при флоу-цитометричен анализ – може да се използва 6-ямкова плака или различни по големина матраци за култивиране (фласкове). При имуноцитохимия, клетките може да се култивират върху стъкло(diameter=15 мм) в 24-ямкова плака.

При флоу-цитометричен анализ на инкорпорацията на BrdU се използва най-често FITC-белязано α-BrdU антитяло. Също така се използва пропидиев йодид, който се свърза с също с ДНК и флуоресцира в спектъра на PE (фикоретрин).

Приложение на метода:
1. ELISA
2. Flow cytometry
3. Имунохистохимия или имуноцитохимия.