Основни реактиви за замразяване:

1 Среда за култивиране на клетките (най-често DMEM или RPMI1640) (70%)
2 Серум (най-често за целта се използва FCS или FBS) (20%)
3 DMSO (10%)
4 Крио-епруветки (фиолки)

Процедура
1 Подготовка на клетките
- Промиване с PBS буфер, за да се премахнат мъртвите клетки (1-3 мл).
- Трипсинизиране на клетките с 1-3 мл трипсин , в зависимост от обема на матрака за 5-15 мин (в зависимост от клетъчната култура) на 37С в термостат, като следим действието на ензима на микроскоп.
- Спиране на реакцията със серум, като обемът е поне колкото обема на трипсина.
- Прехвърляме суспензията в 15мл епруветка, доливаме среда и центрофугираме за 5’ на 1000 rpm
- Отливаме средата и ресуспендираме утайката в среда и серум

2 Броене на клетките на камера на Бюргер или Нюбауер

Разреждаме до желаната концентрация за фиолка (1 мл краен обем за замразяване)

3 Приготвяне за замразяване

Накапваме във фиолките:
0.7 мл клетъчна суспензия в с определено количество клетки
0.1 мл DMSO, непосредствено преди замразяването, след което леко се разбърква

4 Замразяване
постепенно намаляване на температурата на клетъчната суспензия в следната последователност:

- на лед
- -20 С за 2ч
- -70 С - overnight
- -126 C в течен азот

Клипче на GIBCO за замразяване на клетъчни култури: